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重组胰蛋白酶是一种使用基因工程技术生产的酶。它是胰蛋白酶的一种形式，是在实验室中合成的，而不是从动物来源（例如猪或牛的胰腺）中提取的。冀百康生物——重组胰蛋白酶，在整个生产流程中，严格避免了使用任何动物源性原材料，解决了传统使用的猪或牛胰蛋白酶可能带来病毒污染的风险，确保了该重组胰蛋白酶产品的安全性、高纯度及超高比活等特性。
*动物源与非动物源胰蛋白酶的对比
重组胰蛋白酶具有许多潜在用途，包括应用于在医药开发、用作研究工具以及生物技术应用，例如蛋白类药物的生产、细胞消化、疫苗生产以及用于细胞分析的组织样本的制备等，总体而言，重组胰蛋白酶在生物制药和科研领域是不可或缺的关键酶。
*酶
为满足下游企业在生物药以及科研领域的不同应用需求，冀百康生物提供出四款级别的重组胰蛋白酶可供选择，分为重组热稳定胰蛋白酶、重组胰蛋白酶（细胞培养级）、重组胰蛋白酶（药典级）、重组胰蛋白酶（1:250）。
*冀百康重组胰蛋白酶
*具体产品信息可联系业务人员。
选型指南
面对多种多样的重组胰蛋白酶，下游如何选购才更精准？请参考冀百康生物为您提供的详尽选型指南。
01 应用于细胞消化，疫苗生产
重组胰蛋白酶（细胞培养级）
重组胰蛋白酶（细胞培养级）在疫苗生产的环节中作为细胞消化的工具介入，尤其是贴壁依赖型动物细胞的消化。在细胞培养的过程中，使用重组胰蛋白酶（细胞培养级）对贴壁细胞进行处理，能够快速水解细胞间的沾粘蛋白，释放出单个独立细胞。高纯度的细胞培养级无杂蛋白/杂酶等，可以减少对细胞的非特异性影响，提高消化过程的特异性和温和性，保持细胞的完整性和细胞活性。同时，细胞培养级具有超高的比活性，能提升消化效率，更快速地处理细胞样本。
* 胰蛋白酶消化前后对比
（来源：分析测试百科网《细胞消化的小技巧》）
● 不含冻干保护剂，高纯度 (SDS-PAGE) ≥95%，蛋白含量≥90%；
● 更高比活性，通常≥4500USP units/mg pro.，每批次不同，详见COA
02 应用于蛋白质分析与纯化
重组胰蛋白酶（药典级）
重组胰蛋白酶（药典级）符合美国药典USP42和中国药典2020版中重组胰蛋白酶相关标准，更适合常规的蛋白质分析与纯化。药典级纯度≥95%，可以精准快速地将大分子的蛋白质的切割成较小的片段或肽链，避免杂质或其他蛋白质影响，提高蛋白质的纯度。另外，药典级超高比活的优势，可在较短的时间内实现完全酶解，减少样品的周转时间，加快蛋白质分析与纯化过程；减少了非特异性切割和酶自身降解的可能性，从而保证了蛋白类药物的质量和均一性。
*蛋白质全谱分析示意图
（来源：武汉国家级人类遗传学资源库)
● 含冻干保护剂，高纯度≥95%，蛋白含量＞50%；
● 更高比活性，通常≥5000USP units/mg pro.，每批次不同，详见COA
03 应用于生物药物生产，如胰岛素
重组热稳定胰蛋白酶
重组热稳定胰蛋白酶因其在高温条件下依旧维持活性的特性，可完美规避在使用重组胰蛋白酶过程中反复冻融而造成的损耗。本品不含DFP、PMSF和TLCK等酶抑制剂，具有与天然胰蛋白酶相同的活性和特异性。与重组猪胰蛋白酶等不同，该重组热稳定胰蛋白酶不易自切，配制为细胞消化液后可在2-8℃稳定存放，在胰岛素的生产过程中，重组热稳定胰蛋白酶常用于胰岛素前体蛋白的酶切转换步骤，将胰岛素前体蛋白转化为活性胰岛素。重组热稳定胰蛋白酶的高热稳定性和高比活性有助于在温和的条件下进行高效酶切，减少副产物的生成。
*人胰岛素、甘精胰岛素和谷赖胰岛素的前-胰岛素原的主要胰蛋白酶切割位点图。
(来源：冷春生, 崔航, 李淑楠 . 重组酶在胰岛素生产中的应用[J]. 中国药学(英文版), 2014, 23(5): 335-337.)
● 高纯度≥95%，蛋白含量＞30%
● 不易自切，稳定性较高
● 更高比活性，通常≥2500USP units/mg pro.，每批次不同，详见COA
04 应用于疫苗生产中初生组织解离中的细胞解离
重组胰蛋白酶（1:250）
重组胰蛋白酶（1：250）具有良好的消化性，可以有效地破坏细胞粘附和从组织中解放细胞，常应用于疫苗生产中初生组织解离中的细胞解离。1：250中含有EDTA，能抑制金属依赖性酶，促进细胞间连接的破坏，加快组织细胞剥离。
*动物细胞培养过程
(来源：生物器材网《哺乳动物细胞培养过程&培养条件》)
# 应用案例
推荐使用方法
重组胰蛋白酶（细胞培养级）
● 溶液配制：重组胰蛋白酶室温下融化，取适量胰蛋白酶，加入HBSS平衡液（或其他适宜细胞消化的缓冲液，如需要加入EDTA其终浓度推荐 0-1mM，最好不超过2mM），推荐一般使用的胰蛋白酶浓度约为 0.1-0.3mg/ml（浓度根据不同细胞进行调整），轻柔混匀；该步骤可在室温环境操作；
● 使用0.22μm滤膜对上述胰蛋白酶溶液过滤并转移至无菌容器中；该步骤可在室温环境操作；
● 过滤后的胰蛋白酶溶液应在当天按照要求直接使用（例如加入1ml至T25瓶，37℃消化细胞）
重组胰蛋白酶（药典级）
● 蛋白质的准备——将蛋白质溶解在25mM Tris-HCl，pH8.0的溶液中。
● 酶液准备——称取所需的酶粉，用10mM HCl 溶解，使酶液浓度为1-10mg/ml。
● 反应条件——酶量：目的蛋白（质量比）=1:50-1:1000，最适pH为7.0~9.0
重组热稳定胰蛋白酶
● 蛋白酶切
1）将蛋白质溶解在25mM Tris-HCl（pH7.0-10.0）缓冲液中。
2）将酶粉用1mM HCl（或25mM Tris-HCl，pH8.0）溶解，使酶液浓度为1-10mg/ml。
3）按照酶量：目的蛋白=1mg:50mg-1mg:500mg，或者酶量：目的蛋白=10U:1mg-100U:1mg,在pH 7.0-10.0条件下酶切。
● 细胞消化
1）取酶粉，用HBSS平衡液（或其他适宜细胞消化的缓冲液，如需要加入 EDTA 其终浓度推荐0-1mM，最好不超过2mM），配制为蛋白浓度0.1-0.3mg/ml（或者酶活浓度300U/ml-1000U/ml）的消化液，轻柔混匀。
2）使用 0.22μm 滤膜对上述胰蛋白酶溶液过滤并转移至无菌容器中。
3）该消化液可当天按照要求直接使用（例如加入1ml至T25瓶，37℃消化细胞），也可在2-8℃条件下保存30天。（若需在2-8℃保存更长时间，可购买我公司产品TrypRE select。或与我公司技术人员联系。）
重组胰蛋白酶（1:250）
● 取0.25g重组胰蛋白酶（1：250）粉末，加入100ml HBSS平衡盐溶液制成0.25%的溶液，在室温下搅拌溶解约 10min。
● 用磷酸和氢氧化钠溶液调pH至7.4-7.8之间，用0.22μm膜过滤，置于-20℃下保存。
# 说明：
1、处理难消化细胞，可配制为 0.4-1.0%溶液。
2、HBSS平衡盐溶液配方：400mg/L KCl，60mg/L KH2PO4，350mg/LNaHCO3，8000mg/LNaCl，121mg/L Na2HPO4·12H2O，1000mg/L葡萄糖
*参考文献
1.《中国药典》2020版——重组胰蛋白酶检测要求公示
2.冷春生, 崔航, 李淑楠 . 重组酶在胰岛素生产中的应用[J]. 中国药学(英文版), 2014, 23(5): 335-337.)
