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重组肠激酶
日期:2021-11-11    浏览次数:

重组肠激酶


- 产品简介


      肠激酶(Enterokinase, EK)是一种高度专一性识别 Asp-Asp-Asp-Asp-Lys 序列的蛋白酶,在 Lys 的 C 端水解多肽。具有高度专一性,水解效率高的特点。可在较宽的 pH 范围(4.5~9.5)和较宽温度范围内有效切割 融合蛋白。可除去位于蛋白质 N-末端的融合蛋白,以除去不需要的融合标签。 冀百康重组肠激酶采用重组毕赤酵母高效分泌表达技术,经多级层析纯化,制成的高纯度、高活.性重组牛 肠激酶,不含其他蛋白酶。


   - 产品优势

|无动物源性:无动物病.毒、无致病物质、无外源因子污染,安.全性高。 

|纯度高,比活高。 

|生产规模 1000L 以上。 

|合规性:生产设备和生产环境符合相关法规要求,符合 GMP 指导原则。 

|质量文件完整:按客户需求,可提供相关法规支持文件。



- 产品特性


性状

淡黄.色、无色澄明液体

酶活.性

≥5.0U/μl

ph值

7.0-9.0

纯度 单一主条带
电泳 25.8±2.6 kDa
宿主蛋白残留
≤100ng/mg pro.
外源性 DNA 残留 ≤100ng/mg pro.

酶活定义:在 25℃,12~16 小时内,将 0.5mg 保存于 25mM Tris-HCI pH 8.0 

缓冲液中的融合蛋白切割 95%所需的酶量为 1U。



- 使用方法

【25℃酶切条件为】25mM Tris-HCl PH8.0 体系中融合蛋白 0.1-1mg/ml(蛋白总量 50-100μg),重组 EK 0.1~0.2U,酶切 16~24 小时,用 SDS-PAGE 检测酶切效果。 

【4℃酶切条件为】可在 4℃对底物进行有效低温酶切,但需要将酶切时间延长至 48~64 小时,或增加 2-3 倍酶量。低温酶切有时候可获得比 25℃更好的酶切效果。  在>200mM 咪唑,或>200mMNaCl,或>5%甘油,酶切效果受影响。可参照以下推荐方法进行酶切: 1) 为获得理想酶切结果,请将样品透析到 25mM Tris-HCl pH 8.0 缓冲液中,再进行酶切; 2) 若不便透析,可将样品稀释,咪唑含量在 100mM 以下,NaCl 浓度在 50mM 以下,甘油浓度小于 5%以下进行酶切,酶的用量与蛋白的比例不变(即 1U 酶切 500μg 蛋白); 3) 如果样品溶液中含有上述成分的一种或多种,且不便去除,此时适当增加酶量或延长酶切时间,也可 达到较好酶切效果。 

可对酶切条件进行优化,例如缓冲液 pH,融合蛋白浓度,EK 的量,以及酶切时间,融合蛋白能在稳定条 件下被酶切,用 SDS-PAGE 检测酶切效果。 

去除重组肠激酶的办法:可使用胰蛋白酶抑.制.剂亲和层析去除重组肠激酶。 注意:不建议 37℃条件下酶切,可能会有非特异性酶切出现。




- 运输及稳定性

运输稳定性:冰袋运输,活.性稳定。

储存稳定性:-15℃及以下,24 个月稳定,25℃,一周内无活.性损失。缓冲体系:50mM Tris-HCl,pH8.0,
250mM NaCl,2mMCa2+,50%甘油。

冻融稳定性:反复冻融 5 次,无活.性损失。

本品仅供研究使用,不得用于动物或人类的诊断或治辽。